Многочисленные клинические и экспериментальные исследования свидетельствуют о том, что в патогенезе ряда опухолей у человека и животных важную роль играет нарушение обмена половых гормонов. Этим и объясняется тот интерес, который проявляется в настоящее время к экспериментальному изучению дисгормональных опухолей. В задачу данной статьи входит изложение основных сведений по методике получения некоторых дисгормональных опухолей. Обсуждение вопросов патогенеза, а также подробное описание морфологии опухолей и предопухолевых изменений читатель может найти в подробном обзоре Гарднера и в соответствующих оригинальных работах.
Способы введения гормональных препаратов
Ниже описаны наиболее употребительные способы введения гормональных препаратов.
Подкожное введение масляных растворов. Для растворения гормональных препаратов можно пользоваться самыми различными растительными маслами, а также животными жирами с низкой температурой плавления. Недостатком метода является его трудоемкость и то, что растительные масла плохо всасываются и на месте инъекции иногда очень долго остается олеома. Лучше всего всасываются персиковое, кунжутное, оливковое и арахисовое масла. Касторовое и минеральное масла (вазелиновое) практически не всасываются. Во избежание образования больших олеом, затрудняющих последующие введения при длительных опытах (особенно на мышах), необходимо вводить минимальное количество растворителя (0,1—0,05 мл или даже 0,01 мл). Гормоны в масле вводят ежедневно или один-два раза в неделю. Для приготовления раствора необходимое количество вещества растирают в ступке с небольшим количеством масла, затем добавляют остальную часть растворителя, и смесь помещают на водяную баню (100°) на 1—2 часа. Препарат растворяется до конца и одновременно происходит его стерилизация.
Подкожное введение взвесей в физиологическом растворе. Этим способом пользуются для введения больших доз препарата. Достаточно стойкие медленно оседающие взвеси дают эстрогены, в частности синэстрол и диэтилстильбэстрол, в отличие от андрогенов. Для приготовления взвеси к необходимому количеству вещества добавляют спирт (из расчета 0,1—0,5 мл на 10 мл физиологического раствора) и смесь тщательно растирают, после чего при постоянном помешивании добавляют по каплям физиологический раствор. Взвеси вводят 1 раз в неделю или 1 раз в 2—3 недели.
Пилюли и таблетки. В качестве пилюльной массы употребляют холестерин, парафин, воск и парафин-ланолин. Пользуются также пилюлями и таблетками, спрессованными из чистого вещества. Эстрогенные препараты чаще вводят в пилюлях с тем или иным constitutiens, а андрогены — в пилюлях из чистого вещества. Содержание эстрогена в пилюле составляет обычно 10—20% ее общего веса. Для приготовления пилюль с холестерином или парафином к необходимому количеству гормонального препарата приливают 1—2 капли растительного масла и тщательно растирают. Затем добавляют соответствующее количество расплавленного холестерина или парафина, и смесь помещают з термостат при температуре плавления пилюльной массы на 1—2 часа. Расплавленную массу медленно набирают в предварительно подогретую тонкую стеклянную трубочку или толстую металлическую иглу, слегка смазанную изнутри глицерином или вазелиновым маслом. Как только масса затвердеет, ее осторожно выдавливают мандреном или стеклянным поршнем и разрезают на кусочки необходимой величины.
Такие пилюли лучше сразу делать в асептичных условиях, так как стерилизация их довольно затруднительна. Предлагаемое ополаскивание пилюль спирт-эфиром недостаточно надежно для их стерилизации и при этом часть гормонального препарата из поверхностного слоя пилюли вымывается. Для приготовления восковых и парафин-ланолиновых пилюль (1 часть парафина + 1 часть ланолина) препарат растворяют в пилюльной массе вышеуказанным способом. После остывания ее стерильно раскатывают на стекле в виде тонких палочек, которые затем разрезают на кусочки определенного веса. Во избежание слипания пилюль их слегка присыпают тальком.
Для приготовления пилюль и таблеток из чистого вещества пользуются специальными таблетирующими машинками. Простая по конструкции машинка представляет собой
металлическую пластинку с просверленными в ней насквозь отверстиями различного диаметра. В отверстие плотно набивают препарат, который там спрессовывается и готовая таблетка выталкивается поршнем. Такие таблетки стерилизуют сухим жаром при температуре 100° в течение часа 3 дня подряд. В лаборатории гормонотерапии Института экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР разработан другой простой метод приготовления пилюль из чистого вещества. Сухое вещество тщательно растирают в ступке, в него по каплям добавляют спирт, и массу все время растирают до консистенции густой сметаны. Затем небольшим шпателем массу накладывают в шприц и выдавливают на стекло в виде длинных цилиндриков. Как только последние слегка подсохнут, их отделяют от стекла лезвием безопасной бритвы и дают еще некоторое время подсохнуть. Готовые пилюли разрезают на кусочки определенной длины и, соответственно, веса. Вся процедура проделывается стерильно. Для приготовления пилюль из эстрогенов можно пользоваться обычным шприцем «Рекорд» емкостью 1—2 мл. Для приготовления пилюль из тестостеронпропионата и прогестерона, которые вводят в больших дозах, необходимо выходное отверстие шприца «Рекорд» на 5—10 мл рассверлить до 2—3 мм.
Пилюли вводят в подкожную клетчатку спины или боковой поверхности тела обычно через разрез кожи с помощью пинцета или узкой стеклянной воронки со скошенным концом. При извлечении воронки следует фиксировать пилюлю на месте введения, в противном случае она часто смещается в область разреза и может выделиться. Мелкие пилюли можно вводить путем прокола кожи толстой иглой с мандреном. У мышей место разреза достаточно заклеить коллодием, у крыс при длительных опытах, и особенно у самцов, нужно наложить один шов или скобку Мишеля. Пилюли из чистого вещества вводят один раз в 1—3 месяца в зависимости от дозы и цели исследования. В промежутках между введениями нужно контролировать наличие пилюли, так как последняя при недостаточно асептичном введении может нагноиться. Большие пилюли, порядка нескольких десятков миллиграммов, могут подвергнуться асептической секвестрации. Парафин-ланолиновые пилюли следует вводить не реже одного раза в месяц, так как образующаяся к этому сроку соединительнотканная капсула вокруг пилюли снижает количество поступающего в организм активного вещества. Пилюли с constitutiens дают, по-видимому, более равномерное увеличение уровня того или иного гормона, чем пилюли из чистого вещества. Последние удобны в том случае, когда необходимо вводить относительно большие дозы гормона.
Другие способы введения. Описаны способы внутривлагалищного введения растворов эстрогенов в глицерине. В некоторых случаях пользуются введением эстрогенов в виде мелкодисперсной взвеси с питьевой водой. Применяется также смазывание кожи масляными или спиртовыми растворами гормональных препаратов. Последний метод, несмотря на простоту и эффективность, не дает возможности судить о количестве поступающего в организм препарата.
Каждый из указанных выше способов введения гормональных препаратов имеет свои преимущества и недостатки. Выбор метода зависит прежде всего от задачи, поставленной исследователем, и от условий работы.
Новообразования молочных желез
Получению новообразования молочных желез эстрогенами посвящена большая литература. Рак молочных желез, по-видимому, может быть вызван у мышей и крыс как натуральными, так и всеми синтетическими эстрогенами. Эстрогены вводят подкожно в виде масляных растворов или взвесей, в виде пилюль из чистого эстрогена или с добавлением холестерина или парафина, перорально или путем смазывания кожи масляными растворами.
В настоящее время для получения опухолей применяют главным образом фолликулин (эстрон), диэтилстильбэстрол и весьма близкий ему советский препарат синэстрол (содержит 10 000 м. е. в 1 мг, по активности равен фолликулину, в 2 раза слабее диэтилстильбэстрола). Сведения обо всех выпускаемых в Советском Союзе эстрогенных препаратах можно найти в фармакологических справочниках.
Срок возникновения опухолей обратно пропорционален применяемым дозам эстрогена. Однако большие дозы эстрогенов в силу их значительной токсичности вызывают падеж значительной части животных. Причинами падежа служат гипертрофия предстательной железы, вызывающая задержку мочи у самцов (мышей), пиометра и тубоовариальные абсцессы у самок, а также апоплексия гиперплазированного гипофиза и резкая кахексия животных (в сравнительно более поздние сроки, но ранее срока возникновения опухолей в молочной железе).
Для получения рака молочных желез у самцов-мышей им следует с 20-дневного возраста вводить по 25 у диэтилстильбэстрола (ДЭС) в масле 2 раза в неделю (по данным Лакассаня, такие дозы вызывают рак молочных желез через 3 месяца). При имплантации мышам пилюль содержание в них диэтилстильбэстрола и эстрадиола не должно превышать 25% во избежание токсического эффекта. Достаточно однократной имплантации холестериновой пилюли весом 2—8 мг в возрасте 4—6 недель. Процент появления опухолей при этом колеблется в зависимости от дозы эстрогена, но может доходить до 50—100, латентный период составляет 2—17 месяцев. За время опыта рассасывается примерно 1/10 часть эстрогена, введенного в пилюле.
В работах, посвященных получению рака молочных желез у мышей с помощью эстрогенов, почти не встречается указаний на строение экспериментальных новообразований. Вероятно, они не отличаются от спонтанных опухолей мышей, которые, как известно, по своей морфологии довольно далеки от опухолей молочных желез человека. В противоположность этому морфология экспериментального рака и предраковых изменений молочных желез у крыс изучена значительно подробнее. Они очень напоминают некоторые предраковые процессы и некоторые формы рака молочной железы у женщин.
Для опыта следует брать животных в возрасте 1—3 месяцев. При введении крысам эстрогена в масляном растворе по 25 у в день опухоли начинают появляться только в поздние сроки опыта. При дозе 100 у эстрона в день (3 мг эстрона или синэстрола, или 1,5 мг диэтилстильбэстрола в месяц). Опухоли появляются через 350—400 дней, при дозе 200 у в день — через 150—200 дней. Суммарная доза эстрогена, необходимая для получения рака молочных желез у крыс, приблизительно одинакова при различных дозировках (от 50 до 200 у эстрона в день), так как длительность латентного периода обратно пропорциональна дозировке. Эта суммарная доза примерно равна 30—40 мг эстрона. При употреблении пилюль или таблеток (в виде имплантатов) общая доза эстрогена понижается до 9—10 мг эстрона. Это количество, введенное в виде 2—3 таблеток, вызывает рак через 250—300 дней. В опытах Гешиктера, применявшего различные дозы эстрогенов, рак молочных желез возник у 202 из 555 белых крыс. Близкие данные получены другими авторами, вводившими крысам синтетические эстрогены в масляном растворе или в виде таблеток.
Холестериновые или парафиновые пилюли с эстрогенами следует предпочесть 100% прессованным таблеткам, так как слишком быстрое поступление в организм массивных доз эстрогена вызывает токсикоз и значительную гибель животных в ранние сроки опыта. Большое влияние оказывает порода крыс на частоту возникновения у них опухолей молочных желез под влиянием эстрогенов. Частота рака молочных желез у крыс различных линий, получающих одни и те же дозы эстрогенов, колеблется от 0 до 80%. Мак-Кензи при двукратной имплантации 5—6 мг спрессованного диэтилстильбэстрола, эстрадиола или эстрадиол-дипропионата (вторая таблетка через 1—3 месяца после первой) получил опухоли у 22—24% линейных крыс. У беспородных крыс раки возникли в этих условиях лишь в 5% случаев.
Е. Л. Пригожина применяла для получения опухолей молочных желез у крыс имплантацию восковых пилюль, весивших 10 мг и содержавших 30—33% синэстрола (3—3,3 мг). Пилюли имплантировались под кожу один раз в месяц. Рак возник у 21 из 114 беспородных крыс, переживжих срок появления первых опухолей — 4 1/2 месяца, что составляет 18,4%. 30% парафин-ланолиновые пилюли вызвали опухоли у 21% крыс. У животных, получавших от 1 мг синэстрола в 10% парафин-ланолиновых пилюлях, опухоли возникли лишь в 5% случаев после 13 месяцев опыта, а у получавших по 3—5 мг (2 раза в месяц в виде взвеси в физиологическом растворе) — всего в 4,6%.
Частота возникновения рака молочных желез у кастрированных и некастрированных самок и самцов была одинаковой (то же отмечено и другими авторами). Опухоли, появляющиеся в ранние сроки опыта (4 1/2—6 месяцев), имеют микроскопические размеры. После 6 месяцев (при дозах 1 мг в месяц после 13 месяцев) наблюдаются сформированные опухоли, до 4—5 см в диаметре. По строению большинство новообразований является цистокарциномами; встречаются также альвеолярные, папиллярные и солидные раки. Предраковые изменения соответствуют некоторым формам мастопатии и пролиферирующим папилломам протоков у человека.
Кроме злокачественных опухолей, у крыс, получающих эстрогены, возникают фиброаденомы молочных желез. Для их вызывания следует применять сравнительно малые дозы
эстрогенов в течение длительных сроков. При этом следует учитывать, что опухоли молочных желез, главным образом фиброаденомы, весьма часто возникают спонтанно у старых самок крыс — после 1 1/2 лет. Крысы являются наиболее удобным объектом для экспериментального получения дисгормональных опухолей молочных желез. У кроликов, обезьян и других животных эстрогенами рак молочных желез вызвать не удалось.
Опухоли матки
Ряд клинических и экспериментальных наблюдений указывает на значительную роль эстрогенных гормонов в возникновении и течении различных новообразований матки. Изучение патогенеза опухолей матки у животных имеет важное значение для выяснения этой проблемы.
Фибромиомы матки. Фибромиомы матки получены с помощью эстрогенов у морских свинок рядом авторов. Липшюц применял для этого бензоат эстрадиола: либо в масляном растворе подкожно по 40—80 у три раза в неделю, либо в виде имплантируемых под кожу таблеток весом 6—18 мг (однократно). Опухоли матки возникали при всасывании 1,8—3,3 мг эстрадиола в течение 2 месяцев. Через 3 месяца от начала опыта фибромиомы матки и фибромы брюшной полости возникали у 100% животных.
Мозингер применял эстрадиол и диэтилстильбэстрол (1—4 мг в неделю). В опытах Я. С. Кленицкого подкожное введение масляного раствора синэстрола (1 мг еженедельно) вызвало фибромы или фибромиомы матки у 13 из 25 морских свинок, переживших 25 недель; срок обнаружения опухолей — 3—42 недели. У части животных фибромы возникали и экстрагенитально — в сальнике, брыжейке, брюшине. Введение больших доз синэстрола (3—5 мг в неделю в виде взвеси в физиологическом растворе) не повысило, а снизило процент возникновения новообразований. Введение эстрогенов следует начинать в молодом возрасте. У кастрированных животных фибромиомы вызвать легче.
Возникновение экспериментальных фибромиом матки предупреждают с помощью больших доз прогестерона, тестостерона, кортикостерона. Введением этих гормонов можно вызвать также задержку роста и обратное развитие уже возникших фибромиом. Легкое возникновение и излечение этих опухолей у морских свинок следует отнести за счет видовой специфичности. У крыс и мышей под влиянием эстрогенов также иногда возникают фибромиомы матки.
Рак шейки матки. Несмотря на то, что эстрогенные гормоны играют, по-видимому, немалую роль в возникновении рака шейки матки, экспериментальное получение этой опухоли с помощью эстрогенов представляет значительные трудности. Пери получила плоскоклеточный рак шейки матки у беспородных мышей путем одновременного смазывания кожи 0,1% бензольным раствором эстрона и 3% раствором 1,2,5,6-дибензантрацена. Рак шейки матки возник у 3 из 75 мышей через 6 и 10 месяцев после начала опыта. У контрольных животных, которых смазывали только канцерогеном, такие опухоли не появлялись. Я. С. Кленицкий вводил во влагалище тампоны с каменноугольной смолой (50 раз), а под кожу в течение всей жизни по 200 м.е, бензоэль-фолликулина один раз в 10 дней. Рак шейки матки возник у 2 из 170 животных (в контроле, где применение тампонов со смолой сочеталось с введением растительного масла, также отмечен рак шейки матки у 1 из 60 мышей). При введении бензоэль-фолликулина и влагалищных тампонов с 0,23% раствором 3,4-бензпирена также возникли предраковые изменения и рак шейки матки.
Рак шейки матки у мышей может быть вызван эстрогенами без помощи канцерогенов. При этом большую роль играет происхождение животных, так как самки из высокораковых линий гибнут в сравнительно ранние сроки от рака молочных желез, а самки из низкораковых линий плохо переносят эстрогены и также рано гибнут. Поэтому авторы работали на гибридах низкораковой и высокораковой линий— С57 X СВА и PM X С3Н. Мышам вводили по 16,6 у бензоата эстрадиола или 0,25 мг диэтилстильбэстрола один раз в неделю, начиная с 25—65-го дня от рождения. Рак шейки матки возникал у 33—50—62% животных, переживших срок появления первой опухоли от 200 дней до 1 года.
Наряду с начальными стадиями рака наблюдали сформированные опухоли диаметром в несколько сантиметров с отчетливым деструктивным ростом и наклоностью к метастазированию. Одна из опухолей была успешно перевита. Добавление к эстрадиолу 1 мг тестостерон-пропионата увеличило процент возникновения опухолей матки. Авторы объясняют это тем, что тестостерон предотвращал появление лимфоидных опухолей, вызываемых экстрогенами, от которых гибло в сравнительно ранние сроки около 40% животных.
У крыс введение даже очень больших доз эстрогенов в течение всей жизни вызывает лишь метаплазию эпителия шейки матки в многослойный плоский ороговевающий эпителий. Значительной пролиферации этого эпителия, а тем более злокачественного роста его не наблюдается.
Рак тела матки. Первые литературные сообщения о получении опухолей матки с помощью гормонов принадлежат Пирсон. Она вводила крольчихам фолликулин и
гормоны передней доли гипофиза и получила опухоли рогов матки, напоминающие аденокарциномы. Однако следует помнить, что у крольчих аденокарциномы рогов матки часто возникают спонтанно, в зависимости от породы — от 4,2 до 79%. Поэтому в аналогических опытах на кроликах всегда нужно иметь достаточный контроль. Здесь же следует упомянуть, что у кроликов часто возникает рак матки по типу отдаленных опухолей при различных способах введения канцерогенных веществ (по Берроусу и Бойленду — в 15% случаев).
Е. Л. Пригожиной получены аденокарциномы рогов матки у 11 из 103 крыс, кастрированных в месячном возрасте. Крысам с 2 месяцев ежемесячно вводили под кожу восковые пилюли, содержавшие по 3 мг синэстрола. Большинство опухолей обнаружено через 5—6 месяцев после начала опыта. Все новообразования развились из уплощенного цилиндрического эпителия кист, возникших на конце рогов над лигатурой, наложенной при кастрации.
Эпителий рогов матки сохранился только в этих изолированных участках, на остальном протяжении он был заменен многослойным плоским ороговевающим эпителием. В 4 случаях отмечены множественные метастазы. По строению все опухоли были цистоаденокарциномами.
Опухоли яичников
Основными экспериментальными методами получения опухолей яичников у мышей и крыс является пересадка яичника в селезенку кастрированного животного и облучение всего тела или области яичников рентгеновыми лучами. Многочисленные исследования, проведенные в этом направлении, приведены в обзорах Гарднера и И. Д. Нечаевой. Опыты по вызыванию опухолей яичников ионизирующей радиацией изложены в статье Ю. И. Москалева и В. Н. Стрельцовой, публикуемой в настоящем сборнике. Поэтому мы останавливаемся только на опытах с пересадкой яичников.
Методика пересадки. Под общей анестезией делают разрез кожи спины по средней линии на 1 см выше и 1 см ниже края реберных дуг. Затем производят двустороннюю кастрацию через небольшие разрезы сбоку от позвоночника. После этого через разрез, проведенный параллельно реберной дуге слева, извлекают селезенку. Тщательно освобожденный от жировой ткани яичник вводят глазным пинцетом через небольшой разрез под капсулу селезенки максимально глубже. Швов на капсулу не требуется. Опухоли из трансплантата яичника в сезеленку возникают у кастрированных мышей и крыс довольно часто. Так, Бискинд и Бискинд получили лютеомы у 100% крыс, переживших 317 дней.
Опухоли яичников, возникающие при пересадке в селезенку мышей и крыс, представляют собой главным образом текалютеомы, гранулезоклеточные опухоли и смешанные формы. У мышей наблюдаются также тубулярные аденомы. Опухоли растут медленно, изредка метастазируют в печень. Высокий процент возникновения новообразований позволяет ставить опыты по гормонопрофилактике опухолей яичников. Опухоли яичников легко перевиваются под кожу кастрированных и некастрированных самцов и самок, иногда дают метастазы в печень и легкие.
Опухоли семенников
При длительном введении эстрогенных веществ у мышей некоторых линий возникают опухоли яичек, исходящие из интерстициальных клеток Лейдига. Такие опухоли могут быть получены у самцов линии А, С, BALB/C, С67 X СВА и С57. С наибольшей частотой опухоли возникают в первых 3 линиях.
Бонеер вводила самцам линии А по 3 мг трифенил-этилена в кунжутном масле под кожу раз в неделю, начиная с 4-недельного возраста. Из 10 самцов 8 пережили 50 недель опыта и у всех возникли двусторонние опухоли яичек. Из 16 опухолей 14 были карциномами и 2 — аденомами. Хукер и Пфейфер вводили самцам линии А по 16,6—50 у бензоата эстрадиола или по 0,25 мг стильбэстрола под кожу один раз в неделю в 0,05 мл кунжутного масла. Опухоли яичек появились у 39 из 56 самцов, переживших 8 месяцев.
Стильбэстрол оказался менее токсичным и более эффективным. Из 32 мышей, получивших этот препарат, опухоли яичек возникли у 29. Шимкин и его соавторы вводили мышам высоколейкозной линии под кожу однократно холестериновые пилюли, содержащие 5—50% стильбэстрола, что соответствовало 0,4—3 мг эстрогена. Наиболее эффективными оказались пилюли с 25 и 50% стильбэстрола. В первом случае было получено 4 опухоли яичка на 14 мышей, переживших 6 месяцев, во втором — у всех 5 животных возникли опухоли. Андервонт и его сотрудники, вводя по 1 мг стильбэстрола в виде 20% холестериновой пилюли самцам линии BALB/C, получили после 9 месяцев опыта до 78% (69—94%) опухолей яичка, примерно у 1/3 мышей — двусторонние.
Возникновению опухолей яичек предшествует узловатая гиперплазия интерстициальной ткани, развивающаяся очень скоро после введения эстрогенов. Отдельные беловатые узлы постепенно замещают весь орган. Через тонкую кожу мошонки мыши можно легко наблюдать весь процесс развития опухоли. Возможно проведение биопсии. Опухоль растет медленно и долгое время не прорастает белочную оболочку, однако она все же дает метастазы. Вес пораженного яичка увеличивается до 300—1000 мг. Диаметр опухоли иногда достигает 2,2 см. В опухолях часты некрозы, иногда захватывающие почти все новообразование, что связано с особенностью кровоснабжения органа. Опухоль состоит из пластов и тяжей полигональных клеток типа Лейдига с различной степенью ожирения протоплазмы.
Опухоли яичек иногда удается перевить мелкими кусочками на мышей исходной линии, однако в первых генерациях она растет лишь при одновременном введении эстрогена. В дальнейшем для роста опухолей эстрогена не требуется. Как индуцированные, так и перевивные интерстициальноклеточные опухоли яичек мышей обладают адрогенной активностью, иногда весьма выраженной. Опухоли семенников у крыс можно получить путем пересадки яичка новорожденного или молодого животного в селезенку кастрированных взрослых самцов и самок. Такие опухоли возникают довольно часто.
Опухоли гипофиза
Опухоли гипофиза у лабораторных грызунов могут возникать спонтанно. У крыс и мышей некоторых линий и разводок гиперплазия и аденомы передней доли гипофиза встречаются в довольно большом проценте случаев. Эти изменения наблюдаются у старых животных, обычно не моложе 13 месяцев, чаще в возрасте около 2 лет. Одновременно с возникновением аденом у старых крыс отмечаются и другие изменения эндокринных органов: гиперплазия и лютеинизация яичников, гиперплазия коры надпочечников, кистозная мастопатия и др.
Наиболее эффективным методом экспериментального получения аденом передней доли гипофиза является введение различных эстрогенных веществ. При длительном введении достаточно больших доз аденоматозная гиперплазия может быть вызвана у 100% крыс. Вес гипофиза может доходить до 500 мг (при норме 10 мг), диаметр достигает 1 — 1,5 см. Е. Л. Пригожина показала, что суммарная доза эстрогенов, необходимая для возникновения узловатой гиперплазии передней доли гипофиза у крыс, относительно постоянна (в известных пределах) и что длительность латентного периода возникновения этих изменений обратно пропорциональна дозировке. Введение 1 мг синэстрола в 10% пилюлях раз в 3—4 недели вызывает заметную гиперплазию (вес гипофиза 15—20 мг и более) у 100% крыс через 8 месяцев (суммарная доза —11 мг), а введение 6—10 мг в месяц (взвесь в физиологическом растворе) дает 100% увеличения гипофиза уже через 2 месяца (суммарная доза остается примерно той же — не менее 15 мг).
Аденомы у крыс возникают как у самцов, так и у самок. Однако для получения значительного числа больших аденом выгоднее пользоваться самцами, так как самки при больших дозах (5—10 мг и больше) гибнут от пиометры и тубоовариальных абсцессов до появления больших аденом. Ферс с сотрудниками считают оптимальной дозой для получения достаточного числа аденом у крыс дозу 5—10 мг эстрогена в виде одной-двух 25% холестериновых пилюль.
У мышей эстрогены не всегда вызывают изменения гипофиза. Большие аденомы гипофиза легко диагностировать прижизненно. У животного появляется атаксия, спастические
параличи, хореоидные движения, нистагм и ряд других неврологических симптомов. При таких явлениях животные часто внезапно гибнут от кровоизлияния в полость черепа. Опухоли передней доли гипофиза у крыс и мышей представляют собой хромофобные, часто геморрагические аденомы. В них иногда наблюдается атипическая пролиферация клеток. У крыс эти новообразования обладают преимущественно маммотропной активностью, у мышей они могут обладать маммотропной, адренокортикотропной и соматотропной активностью. Аденомы гипофиза у крыс (но не у мышей) после прекращения введений эстрогенов подвергаются обратному развитию. Аденомы промежуточной доли гипофиза часто возникают и при введении эстрогенов хомякам. Перевиваемые опухоли гипофиза у мышей и крыс получены Ферсом.
Опухоли надпочечников
Опухоли мозгового вещества надпочечников у мышей и крыс спонтанно возникают редко. Аденомы и раки коры, надпочечников встречаются иногда у интактных мышей линий NH, Bagg albino, С и др. У мышей некоторых линий эти опухоли развиваются после кастрации в раннем возрасте. Если кастрировать самок мышей линии extreme dilute (се)
в возрасте 1—3 дня, то между 6-м и 12-м месяцем у 90—100% из них развиваются аденомы и раки коры надпочечников, причем у 68% — двусторонние.
Величина опухолей варьирует от микроскопических узелков до 1,5 см в диаметре. Опухоли состоят из атипичных малодифференцированных эпителиальных клеток. У кастрированных самцов этой линии опухоли наблюдаются реже. У гибридов этой линии с линией dba и С57 опухоли возникают в более позднем возрасте (14—15 месяцев) и не достигают большой величины. У кастрированных мышей линии С57 черных и С57 коричневых узелковая гиперплазия коры встречается редко. Узелковая гиперплазия и опухоли коры надпочечников наблюдаются после кастрации также в линии А и у гибридов этой линии с линией СзН. По данным Дики и Вулли, у 100% самок и самцов гибридов СзН X А первого поколения к 14 месяцам возникают опухоли коры надпочечников. Наибольший диаметр этих опухолей 4—5 см.
Раки коры надпочечников удается перевить, но растут они медленно. Опухоли обладают смешанной гормональной активностью: в одних случаях они обнаруживают выраженную андрогенную активность, в других — преобладает выделение эстрогенных веществ. У кастрированных крыс различных линий и разводок также наблюдается гиперплазия и функционально активные аденомы коры надпочечников.
Опухоли щитовидной железы
Экспериментальные опухоли щитовидной железы можно получить у крыс и мышей при введении им некоторых тиосоединений, ацетиламинофлуорена и радиоактивного йода. Основные сведения по методике получения таких опухолей и их биологических свойств можно найти в подробном обзоре Морриса. Следует добавить лишь несколько общих замечаний. Во-первых, опухоли щитовидной железы у крыс и мышей, возникающие при введении только тиосоединений, появляются лишь после очень длительного воздействия, порядка 400—600 дней. Частота опухолей не так велика, чтобы их можно было использовать как модель для экспериментальной терапии. Однако отдельные опухоли достигают большой величины — до 1 г и более, что дает возможность получения перевиваемых штаммов.
При комбинации тиосоединений и радиоактивного йода или ацетиламинофлуорена частота опухолей и их злокачественность увеличиваются, однако латентный период остается примерно таким же. Во-вторых, при получении опухолей щитовидной железы всегда следует учитывать происхождение животных, поскольку известно, что этот фактор значительно влияет и на частоту и на злокачественность появляющихся опухолей. Наконец, необходимо указать, что введение тиосоединений с питьевой водой или кормом, несмотря на неточность дозировки, нужно предпочесть любому другому методу, как наименее травматичному (учитывая исключительную длительность опыта).
Опухоли почек
При введении эстрогенных веществ самцам золотистых хомяков у них возникают опухоли почек. Подкожное введение хомякам в возрасте 6—12 недель спрессованных
пилюль по 20 мг диэтилстильбзстрола вызывает мелкие опухоли почек через 6 1/2 месяцев. Между 9-м и 12-м месяцем у 70—80% животных развиваются крупные опухоли, которые можно прощупать через брюшную стенку. Если через 3—4 месяца от введения первой пилюли ввести еще 20 мг эстрогена, то процент опухолей увеличивается до 100. Одновременное введение тестостерона препятствует возникновению опухолей. Опухоли всегда возникают в обоих почках в виде множественных узлов. В больших опухолях часто наблюдаются некрозы ткани, кровоизлияния и кисты.
При удалении одной почки опухоли в оставшейся возникают быстрее. Опухоли часто дают имплантационные метастазы в околопочечную клетчатку, в диафрагму, печень, брыжейку, кишечник. Гематогенные метастазы в легкие, лимфатические узлы и печень наблюдаются реже.
Опухоли возникают из эпителия извитых канальцев. Они состоят из пластов и тяжей однородных кубических или цилиндрических клеток, иногда образующих псевдоальвеолярные и папиллярные структуры.
Опухоли можно перевить под кожу молодым хомякам, которым предварительно была введена пилюля с эстрогеном. Перевивка на интактных самцов не удается. Процент прививаемости (35—50%) можно повысить до 100, если через 3—4 месяца после первой ввести вторую пилюлю. Большие опухоли (до 5 см в диаметре) развиваются лишь к 7—12-му месяцу. Даже в 4-й и 5-й генерациях для поддержания роста опухоли требуется введение эстрогена.
ПРИЧИНЫ И СИМПТОМЫ
